92.杜仲 补骨脂 : 【中医理论】
补骨脂四两(炒,研)、杜仲四两(姜水,炒),煮烂河车一具,打为丸服,主治肾阳虚腰痛,《症因脉治》卷一称青娥丸,《惠直堂方》卷二亦名砥柱丸。补骨脂、杜仲性皆温热,功能相似,均具补肾阳、膝腰强、壮筋骨之力,相伍相须,实为治肾阳不足腰痛之良方。青娥者,青年女子也。肾阳旺则能任美色,故名“青娥丸”。又《惠直堂方》之用法,以核桃肉三十个,去皮研和,炼蜜为丸服。
【药理研究】
1.薄层鉴别
1.1 补骨脂的薄层鉴别^[1]
样品供试液制备:称取青娥丸粉末约2g,加氯仿20ml冷浸过夜,滤过,滤液浓缩至5ml备用。阳性对照液制备:称取补骨脂药材粉末约0.5g,加氯仿20ml冷浸过夜,滤液浓缩至5ml备用。阴性对照液制备:称取除补骨脂外青娥丸模拟丸粉末约1.5g,制法同上。化学对照品溶液制备:取补骨脂素、异补骨脂素适量,分别加无水乙醇5ml溶解备用。
操作方法:用毛细血管分别吸取上述5种溶液,点于同一块硅胶G(0.7%CMC-Na)薄层板上,以苯-醋酸乙酯(9.5:0.5)为展开剂展开,展距15cm,晾干后于紫外光365nm处观察,结果样品与化学对照品、阳性对照品在相同位置上显相同颜色荧光斑点。
1.2 杜仲的薄层鉴别^[1]
样品供试液制备:称取青娥粉末约2g,加无水乙醇25ml冷浸过夜,滤过,滤液浓缩至5ml备用。阳性对照液制备:称取杜仲药材粉末约1g,制法同上。阴性对照液制备:称取除杜仲外的青娥丸模拟丸粉末约1g,制法同上。
操作方法:用毛细管分别吸收上述3种溶液点于同一块硅胶G(0.7%CMC-Na)薄层板上,以正丁醇-36%醋酸-水(6:1:3)为展开剂展开,展距15cm,晾干后于紫外光灯365nm观察。结果样品与阳性对照品在相同位置上显相同颜色荧光斑点。
2.补骨脂素、异补骨脂素含量测定^[1]
样品液制备:精密称取60℃干燥5h的青娥丸粉末(过80目筛)约2g,于索氏提取器中,以氯仿回流提取至无色,提取液浓缩定容于10ml容量瓶中。
对照液制备:分别精密称取补骨脂素、异补骨脂素对照品适量,分别加95%乙醇溶解,定容,制成0.3428mg/ml补骨脂素对照液;0.3960mg/ml异补骨脂素对照液。
层析条件:取硅胶G加0.7%CMC-Na(1:3),以电动搅拌器搅匀后,用自动铺板器铺板(10cm×20cm×0.5mm),晾干,于105℃活化1h,置干燥器中备用。
薄层定性:在同一薄层板上分别点对照液和样品液适量,按上述条件展开、晾干、观察。
扫描条件选择:将薄层色谱置于扫描仪上,在200～300nm波长处对特征斑点进行光谱扫描。结果采用补骨脂素为λs=297nm,λR=360nm;异补骨脂素为λs=300nm,λR=360nm,双波长反射法锯齿扫描。
线性关系考察:用定量毛细管分别精密吸取补骨脂素对照液1、2、3、4、5μl点样,按上述条件展开,扫描,测定其峰面积,得回归方程为:Y=17329.6X+5693.2,r=0.9992。同法测定异补骨脂素,得回归方程Y=18406.4X+14334,r=0.9995。
精密度试验:同一斑点连续扫描5次,RSD=0.63%;同一样品在同一薄层不同位置点样测5次,补骨脂素RSD=1.08%,异补骨脂素RSD=1.14%;同一样品在不同薄层上点样测5次,补骨脂素RSD≤2.60%,异补骨脂素RSD≤2.63%。
稳定性试验:取对照液点样,展开,晾干,从晾干后15min起测定,每隔0.5h测定1次,直到4h,测得峰面积基本不变,补骨脂素RSD=0.96%(n=9);异补骨脂素RSD=0.88%(n=9)。说明两者至少在4h内稳定。
样品测定:用定量毛细管分别精密吸取样品4μl,对照液2、3μl,点于同一块薄层板上,按上述条件展开,晾干,定位,扫描测定其峰面积,按外标两点法计算,结果见表12-92-1。
加样回收率测定:分别精密称取补骨脂素、异补骨脂素对照品适量加入样品中,按样品测定项下方法进行测定,结果见表12-92-2。

表12-92-1 青娥丸中补骨脂素、异补骨脂素的含量

样品 补骨脂素 异补骨脂素　 RSD　 RSD 1
2
3
4
5 0.1049
0.1097
0.1037
0.0966
0.1004 2.55
2.60
2.22
1.77
1.51 0.1147
0.1157
0.1125
0.1057
0.1080 2.63
2.71
1.23
2.29
1.87 注:n=4 表12-92-2 加样回收率测定 成分 含量(mg) 测得重(mg) 回收率(%)(%) RSD(%) 补骨脂素 1.2071
1.2224
1.2265
1.1923
1.945 1.8509
1.8750
1.8807
1.8321
1.8485 99.11
100.46
100.71
98.49
100.89 99.89 1.02 异补骨脂素 1.2985
1.3149
1.3193
1.2826
1.2850 2.0745
2.1013
2.1051
2.0694
2.0834 97.29
99.29
99.22
99.34
100.81 99.33 1.0

注:加入量补骨脂为0.6496 mg;异补骨脂素为0.7920 mg
谭氏^[2]等建立了青娥丸(水蜜丸)中有效成分补骨脂素和异补骨脂素的反相高效液相色谱测定方法。Shin - Pack. CLC- ODS分析色谱柱,流动相:甲醇-水(0.5:0.6),检测波长295 nm。结果:补骨脂素回收率为101.0%, RSD2.0%,异补骨脂素分别为98.6%,1.8%;最低检出量为4 μg。
【药理研究】
对大骨骨质疏松模型的影响
沈氏^[2]等运用骨组织形态计量学观察了补骨古方青娥丸加味对大鼠骨质疏松症模型的影响,并与抗骨质疏松药尼乐雌醇及生理盐水进行对照。结果显示,青娥丸及尼乐雌醇组骨小梁密度显著高于生理盐水组,破骨细胞指数明显低于生理盐水组(P均<0.05)。在类骨质含量及骨形成参数值测量中,青娥丸加味组明显高于尼乐雌醇及生理盐水组(P均<0.05)。提示:青娥丸加味不仅能抑制破骨细胞的骨吸收活动,还能增生成骨细胞,产生较多的骨基质,使模型鼠的骨代谢恢复正态平衡。
【临床应用】
沈氏^[4]等报道药用青娥丸加味水煎醇沉液(杜仲、胡桃肉、补骨脂、淫羊藿、干地黄、怀牛膝各12g),终浓度为生药2g/ml。每次20ml,日2次。连服3个月。结果:46例腰背部疼痛明显减轻或缓解。所有病例肾虚症状均有明显改善,骨密度值也有不同程度提高